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NRPB114 & NRPB115——NuPerley DexS-HbP&NuPerley DexS-VirS

发布日期:2020-05-09 阅读次数:4352

1 、产品介绍

          NRPB114 & NRPB115——NuPerley DexS-HbP和NuPerley DexS-VirS硫酸葡聚糖(仿肝素)亲和填料

NuPerley DexS-HbP  NuPerley DexS-VirS 是将硫酸葡聚糖(Dextran Sulfate)键合 在新一代高刚性琼脂糖微球 NuPerley  上形成的一种亲和层析分离介质。硫酸葡聚糖又 称右旋糖酐硫酸酯,是天然多糖右旋糖酐的合成衍生物,具有与肝素类似的的生物活性, 是一种非动物源的仿肝素配基,填料产品被称为仿肝素亲和填料。

NuPerley DexS-HbP 的含硫量相对低(40~80 μmol/mL),可用于蛋白的亲和分离、 纯化,例如血浆蛋白。同时,硫酸酯是一种优良的耐盐型阳离子交换配基,NuPerley DexS- HbP 也可作为阳离子交换填料,对溶菌酶的结合量大于 60 mg/mL,且在 50~150 mM NaCl 盐浓度下仍结合良好。

NuPerley DexS-VirS 的含硫量相对高(70~130 μmol/mL),主要用于用于病毒和病毒 样颗粒(VLP)的捕获与纯化。

2 、产品特点与技术指标

 

产品名称

NuPerley DexS-HbP

NuPerley DexS-VirS

目录编号

NRPB114L

NRPB114S(预装柱)

NRPB115L

NRPB115S(预装柱)

基质

高刚性琼脂糖

配基

硫酸葡聚糖,含硫量 40~80 μmol/mL

硫酸葡聚糖,含硫量 70~130 μmol/mL

粒径范围 a

30~100 μm

平均粒径

~60 μm

溶菌酶结合量

60 mg/mL

~100 mg/mL

推荐工作流速

60~300 cm/h

最大流速与压力 b

>1500 cm/h 0.3 MPa

使用 pH

4~13(长期稳定性),3~14CIP 等短时间操作)

化学稳定性

在常用的水相缓冲液、0.5 mol/L 氢氧化钠、8 mol/L 尿素、30%异丙醇和 70% 乙醇等体系中稳定。8

贮存与运输

20%乙醇,2~8 ℃

保质期

3 

注:a90%体积以上的微球在此粒径范围;b 10 cm 柱高下的最大测试流速。


3 、使用方法参考

 

3.1  色谱柱装填

以下阐述与层析系统连接时,填料的色谱柱装填方法。

1)所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样,液体最好做脱气处理。 装柱液一般为纯水,也可含 10~100 mM NaCl

2)填料用量计算:通过沉降定量填料体积,需要的沉降填料体=柱体积×压缩 比(也称压缩因子)。沉降体积是指填料在 20%乙醇保存液中自然沉降完全读取的稳定 体积。NuPerley DexS-HbP  NuPerley DexS-VirS 的压缩比为~1.10。为使达到装柱比, 可通过柱头下压的方法,也可以通过高流速压柱。

3)填料清洗:将填料悬液充分摇匀后量取相应体积,抽滤除去液体,并用约 3  填料体积的纯化水洗涤,重复 3 次,以除去保存液。

4)装柱填料悬液准备:将填料转移到适当的容器中,加入适量的装柱液,制成 50~75 v%的装柱填料悬液,使用前搅匀。

5)装填前准备:在清洗干净的层析柱下端加入装柱液,以除去下垫片及层析柱下 端的空气,在柱内保留少量的纯水,拧紧下堵头,调整柱子使其垂直于地面。

6)装填:将搅匀后的填料悬液一次性缓慢倒入层析柱内(必要时使用装柱器), 为避免引入气泡,应使之沿层析柱内壁自然流下。将所有填料加入后, 用装柱液将装柱 器加满,拧紧装柱器上盖,将柱子与层析系统连接。

7)压柱:使柱内填料自然沉降(或 50~150 cm/h 的低流速下沉降),待填料沉降 完全后(填料与液体的界面清晰),去除装柱器,装上上柱头,并将柱头下降至界面处; 通过高流速(推荐流速见下表,注意柱压不超过 0.3 MPa),继续压柱至界面清晰稳定, 标记界面稳定时的柱高。停泵, 打开柱头上的阀门/堵头,关闭柱底的阀门/堵头,下压柱 头至标记位置下方与压缩比对应的位置,旋紧柱头,装柱完成。装柱完成后, 需用高流 速平衡柱内的填料。

 

装柱条件

NuPerley DexS-HbP

NuPerley DexS-VirS

压缩比

1.10

装柱流速

600~1500 cm/h

3.2  柱效测定和评价

完成装柱后、使用前可通过柱效测定和评价可以确认层析柱装填质量。柱效通常用 理论塔板高度(HETP)和非对称因子(As)来评价。

3.3  平衡与上样(Equilibration & Loading

在上样前,可用初始缓冲液 A 在操作流速下平衡层析柱,观察检测器的变化,直到 电导、pH  等参数不变。根据应用不同,本产品的缓冲液体系可为磷酸盐、柠檬酸盐和 Tris-HCl 等,pH  4~9 居多,例如 10 mM PB + 150 mM NaCl pH7.5

样品通常溶于上述缓冲液 A,或者将样品溶液进行换液处理,置换成缓冲液 A  系。上样量可按mg  目标蛋白/mL  填料”来设定,通常为 DBC10%  50~80%,例如 NuPerley DexS-HbP 产品对溶菌酶的 DBC10%~10 mg/mL,纯化 BSA 的上样量可为 5~10 mg/mL。除了 DBC10%,也可以测试上样流穿液中的目标蛋白确定上样量。

3.4  洗脱(Elution

洗脱过程则可以进一步提高缓冲液 A 中的盐浓度,添加 0.5~2 M  NaCl 可将目的 蛋白有效洗脱。在前期工艺筛选时建议用线性梯度洗脱以确定合适的洗脱浓度, 在工艺 优化和确定时建议用阶跃梯度洗脱,以节省洗脱液体积和提高效率。

3.5  再生(Regeneration)和在位清洗(CIP

通常上述的再生过程可将填料彻底清洗。若发生柱压升高,或为了避免交叉污染, 可采用以下溶剂进行再生与在位清洗:1~2 mol/L NaCl0.5 mol/L NaOH70%乙醇或 30%  异丙醇等。在位清洗可有效去除介质上的杂质,反向效果更佳。清洗后需用 3~5  柱体积的纯水除去上述溶剂。

3.6  填料保存

填料的初始保存液为 20%乙醇,使用过后可继续用相同的保存液,也可在 20%乙醇 的基础上添加 0.1~1 M NaCl。保存温度在 2~8 ℃为宜,不可冻存。


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