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NRPB83 & NRPB84——NUPharose 4FF和NUPharose 6FF分子筛填料

发布日期:2019-11-12 阅读次数:7748

1 、产品介绍

 

NUPharose 4FF  NUPharose 6FF 是基于纽龙生物经典的 NUPharose 技术平台的琼 脂糖分子筛填料,分子筛填料也称凝胶过滤填料或尺寸(体积)排阻填料。NUPharose 4FF  NUPharose 6FF 分别为 4%6%交联琼脂糖,拥有独特的孔径及其分布。得益于 严格的原料筛选与控制、制球与交联工艺的创新, 本产品的压力/流速特性优异,对生物 大分子的非特异性吸附低,因而产物回收率高,特别适用于病毒颗粒、外泌体等较大颗 粒的分离。

另外,NUPharose 4FF  NUPharose 6FF 拥有良好的物理、化学稳定性,可以作为 基础微球,在修饰上特定的小分子或大分子配基后可用于各种生物分离过程。

2 、产品特点与技术指标

 

品名

NUPharose 4FF

NUPharose 6FF

目录号

NRPB83L

NRPB84L

基质

4%交联琼脂糖

6%交联琼脂糖

球蛋白分离范围

6×10⁴~2×10⁷ Da

1×10⁴~4×106 Da

粒径范围 a

45~165 μm

平均粒径

~90 μm

推荐工作流速

60~300 cm/h

最大流速与压力 b

>900 cm/h 0.3 MPa

>1200 cm/h 0.3 MPa

使用 pH

3~13(长期稳定);2~14(短期稳定)

化学稳定性

在以下溶液中稳定:常用的水相缓冲液、2 mol/L 氢氧化钠、30%异丙醇、70% 乙醇。

温度稳定性

可在中性、水介质、120 ℃条件下灭菌

储存与运输

20%乙醇,2~30 ℃

保质期

5 

注:a90%体积以上的微球在此粒径范围; b 10 cm 柱高下的最大测试流速。


3 、使用方法参考

 

3.1  色谱柱装填

以下为 NUPharose 4FF NUPharose 6FF 的装填方法,若对本产品进行配基修饰后 使用,装填方法可保持不变。

以下阐述与层析系统连接时,填料的色谱柱装填方法。

1)所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样,液体最好做脱气处理。

2)填料用量计算:通过沉降定量填料体积,需要的沉降填料体=柱体积×压缩 比(也称压缩因子)。沉降体积是指填料在 20%乙醇保存液中自然沉降完全读取的稳定 体积。NUPharose 4FF NUPharose 6FF 的压缩比为 1.15。为使达到装柱比,可通过柱 头下压的方法,也可以通过高流速压柱。

3)填料清洗:将填料悬液充分摇匀后量取相应体积,抽滤除去液体,并用约 3  填料体积的纯化水洗涤,重复 3 次,以除去保存液。

4)装柱填料悬液准备:将填料转移到适当的容器中,加入适量的装柱液,制成 50~75 v%的装柱填料悬液,使用前搅匀。

5)装填前准备:在清洗干净的层析柱下端加入装柱液,以除去下垫片及层析柱下 端的空气,在柱内保留少量的蒸馏水,拧紧下堵头,调整柱子使其垂直于地面。

6)装填:将搅匀后的填料悬液一次性缓慢倒入层析柱内(必要时使用装柱器), 为避免引入气泡,应使之沿层析柱内壁自然流下。将所有填料加入后, 用装柱液将装柱 器加满,拧紧装柱器上盖,将柱子与层析系统连接。

7)压柱:使柱内填料自然沉降(或 50~150 cm/h 的低流速下沉降),待填料沉降 完全后(填料与液体的界面清晰),去除装柱器,装上上柱头,并将柱头下降至界面处; 通过高流速(推荐流速见下表,注意柱压不超过 0.3 MPa),继续压柱至界面清晰稳定, 标记界面稳定时的柱高。停泵, 打开柱头上的阀门/堵头,关闭柱底的阀门/堵头,下压柱 头至标记位置下方与压缩比对应的位置,旋紧柱头,装柱完成。装柱完成后, 需用高流 速平衡柱内的填料。

 

装柱条件

NUPharose 4FF

NUPharose 6FF

压缩比

1.15

1.15

装柱流速

600 cm/h

600 cm/h

3.2  柱效测定和评价

完成装柱后、使用前可通过柱效测定和评价可以确认层析柱装填质量。柱效通常用 理论塔板高度(HETP)和非对称因子(As)来评价。

3.3  使用

NUPharose 4FF NUPharose 6FF 对各种缓冲体系均适用,通常的使用步骤为平衡、 上样、洗脱,平衡和洗脱一般为同一种缓冲液,洗脱液一般在 1.5 柱体积以内即可。

3.4  再生(Regeneration)和在位清洗(CIP

常规的再生过程为用纯水洗 2 个柱体积,再用平衡缓冲液洗 2 个柱体积。

在使用数次后(5 次以内),推荐对填料进行在位清洗。可采用以下溶剂进行在位清 洗: 1~2 mol/L NaOH 70%乙醇或 30%异丙醇等。清洗后需用 3~5  柱体积的纯水除去 上述溶剂。

3.5  填料保存

填料的初始保存液为 20%乙醇,使用过后可继续用20%乙醇保存。保存温度在 2~30 ℃ 为宜,不可冻存。


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