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NRPB81 & NRPB82——NUPharose 4B和NUPharose 6B分子筛填料

发布日期:2019-11-12 阅读次数:7647

1 、产品介绍

 

NUPharose 4B  NUPharose 6B 是基于 NUPharose 技术平台的琼脂糖分子筛填料, 分子筛填料也称凝胶过滤填料或尺寸(体积)排阻填料。NUPharose 4B  NUPharose 6B  分别为 4%6%琼脂糖,不同浓度的琼脂糖溶液凝胶化后会形成不同的孔径,而精制琼 脂糖去除了带电荷的杂质,非特异性吸附很低,本产品适用于分离不同分子量的生物分 子。

此外,NUPharose 4B  NUPharose 6B 经过活化后可用于不同亲和配基的偶联,纽 龙生物也提供环氧基团活化的 NUPharose 6BEpoxy Activated NUPharose 6B)。

2 、产品特点与技术指标

 

品名

NUPharose 4B

NUPharose 6B

目录号

NRPB81L

NRPB82L

基质

4%琼脂糖

6%琼脂糖

球蛋白分离范围

6×10⁴~2×10⁷ Da

1×10⁴~4×106 Da

粒径范围 a

45~165 μm

平均粒径

~90 μm

推荐工作流速

10~20 cm/h

最大流速与压力 b

100 cm/h 0.3 MPa

150 cm/h 0.3 MPa

使用 pH

4~9

化学稳定性

在以下溶液中稳定:常用的水相缓冲液

储存与运输

20%乙醇,2~30 ℃

保质期

5 

注:a90%体积以上的微球在此粒径范围; b 10 cm 柱高下的最大测试流速。



3 、使用方法参考

 

3.1  色谱柱装填

以下为 NUPharose 4B  NUPharose 6B 的装填方法,若对本产品进行配基修饰后使 用,装填方法可保持不变。

以下阐述与层析系统连接时,填料的色谱柱装填方法。

1)所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样,液体最好做脱气处理。

2)填料用量计算:通过沉降定量填料体积,需要的沉降填料体=柱体积×压缩 比(也称压缩因子)。沉降体积是指填料在 20%乙醇保存液中自然沉降完全读取的稳定 体积。NUPharose 4B  NUPharose 6B 的压缩比为 1.15。为使达到装柱比,可通过柱头 下压的方法,也可以通过高流速压柱。

3)填料清洗:将填料悬液充分摇匀后量取相应体积,抽滤除去液体,并用约 3  填料体积的纯化水洗涤,重复 3 次,以除去保存液。

4)装柱填料悬液准备:将填料转移到适当的容器中,加入适量的装柱液,制成 50~75 v%的装柱填料悬液,使用前搅匀。

5)装填前准备:在清洗干净的层析柱下端加入装柱液,以除去下垫片及层析柱下 端的空气,在柱内保留少量的蒸馏水,拧紧下堵头,调整柱子使其垂直于地面。

6)装填:将搅匀后的填料悬液一次性缓慢倒入层析柱内(必要时使用装柱器), 为避免引入气泡,应使之沿层析柱内壁自然流下。将所有填料加入后, 用装柱液将装柱 器加满,拧紧装柱器上盖,将柱子与层析系统连接。

7)压柱:使柱内填料自然沉降(或 10~20 cm/h 的低流速下沉降),待填料沉降完 全后(填料与液体的界面清晰),去除装柱器,装上上柱头,并将柱头下降至界面处;通 过高流速(推荐流速见下表,注意柱压不超过 0.3 MPa),继续压柱至界面清晰稳定,标 记界面稳定时的柱高。停泵, 打开柱头上的阀门/堵头,关闭柱底的阀门/堵头,下压柱头 至标记位置下方与压缩比对应的位置,旋紧柱头,装柱完成。装柱完成后, 需用高流速 平衡柱内的填料。


 

装柱条件

NUPharose 4B

NUPharose 6B

压缩比

1.15

1.15

装柱流速

~50 cm/h

~50 cm/h

3.2  柱效测定和评价

完成装柱后、使用前可通过柱效测定和评价可以确认层析柱装填质量。柱效通常用 理论塔板高度(HETP)和非对称因子(As)来评价。

3.3  使用

NUPharose 4B  NUPharose 6B  pH  4~9 范围内的各种缓冲体系均适用,通常 的使用步骤为平衡、上样、洗脱,平衡和洗脱一般为同一种缓冲液,洗脱液一般在 1.5 柱体积以内即可。

3.4  再生(Regeneration)和在位清洗(CIP

常规的再生过程为用纯水洗 2 个柱体积,再用平衡缓冲液洗 2 个柱体积。

在使用数次后(5 次以内),推荐对填料进行在位清洗。可采用以下溶剂进行在位清 洗:70%乙醇或 30%异丙醇等。清洗后需用 3~5  柱体积的纯水除去上述溶剂。值得注意 的是,NUPharose 4B  NUPharose 6B 不适合用 NaOH 进行清洗。

3.5  填料保存

填料的初始保存液为 20%乙醇,使用过后可继续用20%乙醇保存。保存温度在 2~30 ℃ 为宜,不可冻存。




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