3 、使用方法参考

3.1  色谱柱装填

以下为 NUPharose 4B 和 NUPharose 6B 的装填方法，若对本产品进行配基修饰后使 用，装填方法可保持不变。

以下阐述与层析系统连接时，填料的色谱柱装填方法。

（1）所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。

（2）填料用量计算：通过沉降定量填料体积，需要的沉降填料体积=柱体积×压缩 比（也称压缩因子）。沉降体积是指填料在 20%乙醇保存液中自然沉降完全读取的稳定 体积。NUPharose 4B 和 NUPharose 6B 的压缩比为 1.15。为使达到装柱比，可通过柱头 下压的方法，也可以通过高流速压柱。

（3）填料清洗：将填料悬液充分摇匀后量取相应体积，抽滤除去液体，并用约 3 倍 填料体积的纯化水洗涤，重复 3 次，以除去保存液。

（4）装柱填料悬液准备：将填料转移到适当的容器中，加入适量的装柱液，制成 50~75 v%的装柱填料悬液，使用前搅匀。

（5）装填前准备：在清洗干净的层析柱下端加入装柱液，以除去下垫片及层析柱下 端的空气，在柱内保留少量的蒸馏水，拧紧下堵头，调整柱子使其垂直于地面。

（6）装填：将搅匀后的填料悬液一次性缓慢倒入层析柱内（必要时使用装柱器）， 为避免引入气泡，应使之沿层析柱内壁自然流下。将所有填料加入后， 用装柱液将装柱 器加满，拧紧装柱器上盖，将柱子与层析系统连接。

（7）压柱：使柱内填料自然沉降（或 10~20 cm/h 的低流速下沉降），待填料沉降完 全后（填料与液体的界面清晰），去除装柱器，装上上柱头，并将柱头下降至界面处；通 过高流速（推荐流速见下表，注意柱压不超过 0.3 MPa），继续压柱至界面清晰稳定，标 记界面稳定时的柱高。停泵， 打开柱头上的阀门/堵头，关闭柱底的阀门/堵头，下压柱头 至标记位置下方与压缩比对应的位置，旋紧柱头，装柱完成。装柱完成后， 需用高流速 平衡柱内的填料。

3.2  柱效测定和评价

完成装柱后、使用前可通过柱效测定和评价可以确认层析柱装填质量。柱效通常用 理论塔板高度（HETP）和非对称因子（As）来评价。

3.3  使用

NUPharose 4B 和 NUPharose 6B 对 pH 在 4~9 范围内的各种缓冲体系均适用，通常 的使用步骤为平衡、上样、洗脱，平衡和洗脱一般为同一种缓冲液，洗脱液一般在 1.5 柱体积以内即可。

3.4  再生（Regeneration）和在位清洗（CIP）

常规的再生过程为用纯水洗 2 个柱体积，再用平衡缓冲液洗 2 个柱体积。

在使用数次后（5 次以内），推荐对填料进行在位清洗。可采用以下溶剂进行在位清 洗：70%乙醇或 30%异丙醇等。清洗后需用 3~5  柱体积的纯水除去上述溶剂。值得注意 的是，NUPharose 4B 和 NUPharose 6B 不适合用 NaOH 进行清洗。

3.5  填料保存

填料的初始保存液为 20%乙醇，使用过后可继续用20%乙醇保存。保存温度在 2~30 ℃ 为宜，不可冻存。