1 、产品介绍
NUPharose 4B 和 NUPharose 6B 是基于 NUPharose 技术平台的琼脂糖分子筛填料, 分子筛填料也称凝胶过滤填料或尺寸(体积)排阻填料。NUPharose 4B 和 NUPharose 6B 分别为 4%和6%琼脂糖,不同浓度的琼脂糖溶液凝胶化后会形成不同的孔径,而精制琼 脂糖去除了带电荷的杂质,非特异性吸附很低,本产品适用于分离不同分子量的生物分 子。
此外,NUPharose 4B 和 NUPharose 6B 经过活化后可用于不同亲和配基的偶联,纽 龙生物也提供环氧基团活化的 NUPharose 6B(Epoxy Activated NUPharose 6B)。
2 、产品特点与技术指标
品名 | NUPharose 4B | NUPharose 6B | |
目录号 | NRPB81L | NRPB82L | |
基质 | 4%琼脂糖 | 6%琼脂糖 | |
球蛋白分离范围 | 6×10⁴~2×10⁷ Da | 1×10⁴~4×106 Da | |
粒径范围 a | 45~165 μm | ||
平均粒径 | ~90 μm | ||
推荐工作流速 | 10~20 cm/h | ||
最大流速与压力 b | 100 cm/h ,0.3 MPa | 150 cm/h ,0.3 MPa | |
使用 pH | 4~9 | ||
化学稳定性 | 在以下溶液中稳定:常用的水相缓冲液 | ||
储存与运输 | 20%乙醇,2~30 ℃ | ||
保质期 | 5 年 |
注:a90%体积以上的微球在此粒径范围; b 10 cm 柱高下的最大测试流速。
3 、使用方法参考
3.1 色谱柱装填
以下为 NUPharose 4B 和 NUPharose 6B 的装填方法,若对本产品进行配基修饰后使 用,装填方法可保持不变。
以下阐述与层析系统连接时,填料的色谱柱装填方法。
(1)所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样,液体最好做脱气处理。
(2)填料用量计算:通过沉降定量填料体积,需要的沉降填料体积=柱体积×压缩 比(也称压缩因子)。沉降体积是指填料在 20%乙醇保存液中自然沉降完全读取的稳定 体积。NUPharose 4B 和 NUPharose 6B 的压缩比为 1.15。为使达到装柱比,可通过柱头 下压的方法,也可以通过高流速压柱。
(3)填料清洗:将填料悬液充分摇匀后量取相应体积,抽滤除去液体,并用约 3 倍 填料体积的纯化水洗涤,重复 3 次,以除去保存液。
(4)装柱填料悬液准备:将填料转移到适当的容器中,加入适量的装柱液,制成 50~75 v%的装柱填料悬液,使用前搅匀。
(5)装填前准备:在清洗干净的层析柱下端加入装柱液,以除去下垫片及层析柱下 端的空气,在柱内保留少量的蒸馏水,拧紧下堵头,调整柱子使其垂直于地面。
(6)装填:将搅匀后的填料悬液一次性缓慢倒入层析柱内(必要时使用装柱器), 为避免引入气泡,应使之沿层析柱内壁自然流下。将所有填料加入后, 用装柱液将装柱 器加满,拧紧装柱器上盖,将柱子与层析系统连接。
(7)压柱:使柱内填料自然沉降(或 10~20 cm/h 的低流速下沉降),待填料沉降完 全后(填料与液体的界面清晰),去除装柱器,装上上柱头,并将柱头下降至界面处;通 过高流速(推荐流速见下表,注意柱压不超过 0.3 MPa),继续压柱至界面清晰稳定,标 记界面稳定时的柱高。停泵, 打开柱头上的阀门/堵头,关闭柱底的阀门/堵头,下压柱头 至标记位置下方与压缩比对应的位置,旋紧柱头,装柱完成。装柱完成后, 需用高流速 平衡柱内的填料。
装柱条件 | NUPharose 4B | NUPharose 6B |
压缩比 | 1.15 | 1.15 |
装柱流速 | ~50 cm/h | ~50 cm/h |
3.2 柱效测定和评价
完成装柱后、使用前可通过柱效测定和评价可以确认层析柱装填质量。柱效通常用 理论塔板高度(HETP)和非对称因子(As)来评价。
3.3 使用
NUPharose 4B 和 NUPharose 6B 对 pH 在 4~9 范围内的各种缓冲体系均适用,通常 的使用步骤为平衡、上样、洗脱,平衡和洗脱一般为同一种缓冲液,洗脱液一般在 1.5 柱体积以内即可。
3.4 再生(Regeneration)和在位清洗(CIP)
常规的再生过程为用纯水洗 2 个柱体积,再用平衡缓冲液洗 2 个柱体积。
在使用数次后(5 次以内),推荐对填料进行在位清洗。可采用以下溶剂进行在位清 洗:70%乙醇或 30%异丙醇等。清洗后需用 3~5 柱体积的纯水除去上述溶剂。值得注意 的是,NUPharose 4B 和 NUPharose 6B 不适合用 NaOH 进行清洗。
3.5 填料保存
填料的初始保存液为 20%乙醇,使用过后可继续用20%乙醇保存。保存温度在 2~30 ℃ 为宜,不可冻存。