3 、使用方法参考

NHS 预活化填料的保存液为 100%的异丙醇，在使用前需要将保存液去除。为保持 NHS 预活化填料的偶联能力，需预先准备好经 0~4 ℃预冷的置换溶液与反应液，且各步 骤之间尽可能少停留。以下为将配基偶联至 NHS 预活化填料的一般步骤。

4、应用实例参考

实验名称：NHS NUPharose FF 偶联 IgG。

步骤 1：配制抗体偶联液。取 100 mg IgG，加入 10 mL 偶联缓冲液（0.2 M NaHCO3， 0.5 M NaCl ，pH 8.3）溶解，留 0.1 ml 以测定偶联率。

   步骤 2 ：偶联反应。取 10 ml NHS NUPharoseFF ，用预冷的 50 ml 1 mM 盐酸分三次 清洗去除保存液。清洗后立即与抗体偶联溶液混合，在 4 ℃条件下震荡过夜，进行偶联 反应。

   步骤 3：封闭。滤出反应液， 用 50 ml 偶联缓冲液清洗偶联后的凝胶，然后用 10 ml 封闭缓冲液（0.2 M NaHCO3, 0.5 MNaCl, 0.5M  乙醇胺, pH8.3），在室温条件下震荡 4 小 时以封闭未偶联的基团，封闭后用 50 ml 蒸馏水分多次将微球清洗干净。

步骤 4：检测。偶联前后的反应液用 SDS-PAGE 检测，计算偶联效率，偶联好的填 料根据配基特性测定功能。无法通过测定偶联后反应液在 280 nm 波长下的吸光度来计 算偶联率，因为 NHS 基团在 280 nm 的吸收强。

注意事项

1、如果配基的稳定性不了解，可以选择不同 pH 的缓冲液和温度，不加填料模拟偶 联条件，观察溶液是否会产生沉淀。沉淀将影响偶联效果，可以降低 pH 或温度，同时 可以加 5%左右的甘油或 PEG 保护蛋白，避免产生沉淀。

2、偶联的缓冲液可以是碳酸盐、硼酸盐和磷酸盐缓冲液，不能使用氨基的缓冲体 系，如 Tris-HCl 缓冲液。

3、封闭的缓冲液一般使用带氨基的小分子试剂，如乙醇胺、Tris 等，在 pH 8~9、 室温条件下数小时可封闭完全。

       4、在偶联中尽量使用温和的混匀方式，如震荡、翻转、旋转等。如使用机械搅拌， 需要降低搅拌的速度，只要把填料能混匀完全悬浮起来即可，避免剧烈搅拌使凝胶微球 破碎或使蛋白变性。不可使用磁力搅拌。

5 、产品规格与订购信息

基于强大的研发实力和丰富的数据积累，除了下述标准型号的填料，纽龙生物接受 定制非标准型填料产品。纽龙生物竭力在最短时间内交付客户， 为客户提供最佳的产品 与服务。